如何運(yùn)用BLS細(xì)胞融合儀及胚胎聚集針創(chuàng)建胚胎
注射器內(nèi)吸入培養(yǎng)基，在35mm組織培養(yǎng)板上微滴（大致直徑3mm）點(diǎn)樣成若干行（列）。向培養(yǎng)板內(nèi)小心注入石蠟油使其覆蓋整板，注意不要使石蠟油直接傾倒在微滴上。石蠟油很容易越過這些微滴。石蠟油的量要完全覆蓋這些微滴。
使用配件按照說明操作，制作凹陷。
37度，5%CO2條件下孵育培養(yǎng)板幾小時(shí)，目的是讓培養(yǎng)基在液滴內(nèi)達(dá)到平衡。這一步可以在形成凹陷的步驟之前進(jìn)行。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備好待聚集的細(xì)胞，組織或胚胎，不要將它們長時(shí)間暴露在室溫下或脫離*適培養(yǎng)條件時(shí)間過長。通過在組織培養(yǎng)板蓋上加入幾滴M2培養(yǎng)基和Tyrode’s酸溶液來去除卵透明帶。將組織培養(yǎng)板的培養(yǎng)區(qū)域表面如此處理后，胚胎將本能的黏附在表面—因此我們需要使用蓋。確認(rèn)所有培養(yǎng)基溶液和酸液都接近室溫。將胚胎放置在一滴M2培養(yǎng)基上。取盡可能少的內(nèi)含10-20個(gè)胚胎的培養(yǎng)基，并移到一滴酸液上。重復(fù)這個(gè)步驟并將胚胎移到新的一滴酸液上。讓胚胎在吸頭內(nèi)保持上下移動(dòng)，觀察卵透明帶是如何溶解的。迅速將胚胎移入M2培養(yǎng)基。用幾滴培養(yǎng)基溶液洗滌并移入剛才制成的凹陷中。
胚胎培養(yǎng)條件是聚集產(chǎn)量的一個(gè)重要因素，因?yàn)榕咛ヒ囵B(yǎng)過夜，如果是四倍體胚胎在移入母體前需要培養(yǎng)48小時(shí)。在培養(yǎng)的每個(gè)細(xì)節(jié)都必須小心操作控制。這包括溫度，大氣，培養(yǎng)基，室溫操作時(shí)間及礦物油質(zhì)量。
